特殊醫學用途配方食品(foods for special medical purpose, FSMP)，簡稱特醫食品。我國特醫食品行業由于起步較晚，目前規模相對較小，但是近年來呈現出良好的發展態勢，截至2024年7月1日，共有192款特醫食品獲批，第一季度與第二季度分別新增特醫食品17款與11款。食品安全國家標準特殊醫學用途配方食品通則中明確規定多種維生素含量。其中維生素A和D是人體生長發育的必需物質，尤其對胎兒、嬰幼兒的發育，上皮組織的完整性，視力，生殖器官，血鈣和磷的恒定，骨骼、牙的生長發育有重要作用。維生素E是一種優良的天然抗氧化劑，能抑制不飽和脂肪酸的氧化，減少過氧化脂質的形成以及對機體生物膜的損害，有抗衰老、抗癌及防止動脈粥樣硬化作用。
目前有關配方食品中，維生素 ADE 的測定方法較多，其中操 作步驟中對于脂溶性維生素基本都要經過皂化、提取、洗滌、 濃縮等復雜的前處理步驟，并且無法實現一個方法完成以上幾 種維生素的同時測定。賽默飛液相團隊從 2010 年開始嘗試利 用特色的雙三元液相系統，結合二維色譜實現維生素 A、維生素 D2、D3 以及維生素 E 四種同分異構體的同時測定，前后共推出六代方法對該方案進行不斷優化。本文在先前研究的[2]基礎上，通過優化模塊配置、流動相組成、色譜柱型號、方法梯度等，提高了方法穩定性以及幾種維生素的分離度，并在二維色譜的基礎上，通過增加在線固相萃取的設定，將傳統的人工液液萃取、洗滌和干燥濃縮等步驟同時轉移到儀器自動完成， 大大簡化了前處理過程，減少有機溶劑的使用以及與實驗人員的接觸，使整個實驗更加環保，大大降低實驗成本的同時也提高了實驗的安全性。
實驗部分
儀器：ThermoFisher Vanquish Core 高效液相色譜儀 SPE 泵：Vanquish Quaternary Pump (VC-P20-A-01) 一維、二維泵：Vanquish Dual Pump (VC-P33-A-01) 自動進樣器：Vanquish sampler CT (VC-A12-A-02, 100μL 定 量環) 柱溫箱：Vanquish Column Compartment C(VC-C10-A-03， 含兩個 2p-6p 切換閥) 檢測器：Variable Wavelength Detector C(VC-D40-A-01, 含11μL流通池) Vanquish Diode Array Detector HL (VH-D10-A, 含 60mm 流通池)
色譜軟件：Chromeleon Chromatography Data System7.3.1
樣品前處理及標準品溶液制備：參考AN_24019_HPLC 在線固相萃取聯用二維液相色譜測定食品中維生素 A、D、E及異構體含量
在線固相萃取-二維液相色譜法測定
在線固相萃取-二維液相色譜（Online SPE-2D-LC）系統連接見圖1所示
(1D, 第一維; 2D, 第二維; SPE, 在線固相萃取柱; Trap, 捕集柱)
實驗結果與討論：
對照品和樣品溶液譜圖
維生素A、維生素E四個同分異構體和維生素D2、維生素D3對照品和樣品溶液一維和二維分析譜圖見圖2-a、b、c。
圖2a 維生素A對照品及樣品一維325 nm譜圖(上圖為對照品，下圖為樣品)
圖2b 維生素E對照品及樣品一維294 nm譜圖(上圖為樣品，下圖為對照品)(點擊查看大圖)
圖2c 維生素D對照品及樣品一維 264 nm譜圖(上圖為對照品，下圖為樣品)
線性及靈敏度
按照表1標準曲線濃度配置溶液，分別進樣100μL，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，考察方法的線性范圍及定量限。結果顯示，各維生素在其濃度范圍內線性良好，相關系數均>0.999。方法靈敏度較高，滿足標準要求，方法線性及檢測限(S/N>3)結果見表3，標準曲線見圖3，最低濃度的分離圖譜見圖5。
表3 方法線性及靈敏度
精密度
采用7#濃度標準品混合溶液連續進樣6針考察精密度。結果如表4所示，6針樣品各峰的峰面積RSD%均小于0.31%，滿足方法要求，體現Vanquish Core液相色譜良好的穩定性和重現性。見表4。
表4 樣品連續進樣結果（n=6）
回收率
取一定量的樣品，加入適量的標準液，按照2.5.2前處理后，分別測定維生素ADE的含量，計算出樣品與標準濃度扣除樣品濃度后的加標回收率。見表5。
表5 回收實驗結果（n=6）
樣品測試結果
采用上述方法對市售配方奶粉和特殊醫學配方食品樣品進行測試，結果如表6顯示，樣品基質對目標維生素測試無干擾，表明方法適合不同食品中維生素A、D、E含量的測定。
表6 樣品測試結果
結論
本文采用賽默飛Vanquish Core液相色譜，在前期數代二維液相色譜同時測定食品中維生素A、D、E方案基礎上，建立了一種皂化液直接稀釋上樣，測定維生素A、維生素D2、D3以及維生素E四種同分異構體的方法。該方法采用全自動在線SPE結合中心切割二維液相色譜取代傳統的液液萃取和進一步純化，簡化了樣品的整個分析工作流程。方法學實驗結果表明本方法靈敏度、線性、重現性及準確度均良好。實驗簡化樣品前處理過程，縮短樣品分析周期，大幅提高了分析效率及降低實驗成本。利用賽默飛獨特的雙三元液相，模塊搭建更緊湊，一套液相的臺面占地可以完成多套液相的測試工作，為企業節省了空間及時間成本。
參考文獻：
[1] 宋前流，陳群. 用藥護理. 北京. 人民軍醫出版社. 2014. 353-355頁
[2] AN_20071_HPLC. 在線固相萃取-二維液相色譜法分析配方奶粉中的維生素A、D和E異構體含量.
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